Cotonetes microaplicadores dentais

LEDs e filtros de emissão foram escolhidos para corresponder aos comprimentos de onda de excitação e emissão do corante fluorescente intercalado. Para considerar o desempenho do nosso ensaio de detecção no presente fluxo de trabalho científico, um protocolo com amostras simuladas de NP/swab nasal foi desenvolvido, conforme mostrado na Fig. Devido à instabilidade do RNA, o uso de saliva crua exige transporte rápido para um laboratório para extração de materiais virais e análise da resposta em cadeia da polimerase. O estudo foi único por utilizar um novo kit de coleta contendo um fluido conservante e viricida, permitindo o armazenamento e o transporte seguros e protegidos das amostras. A pesquisa confirmou a viabilidade de um dispositivo de coleta simples e seguro para detecção salivar de SARS-CoV-2 no ambiente de um centro de testes de COVID-19.

As Figuras 4 A–C mostram um diagrama esquemático, uma imagem e desenhos mecânicos do cartucho microfluídico de diagnóstico usado para detecção rápida de SARS-CoV-2 em VTM. As regiões de amplificação e diagnóstico incluem seis câmaras de amplificação em formato de torta.

Após o carregamento completo das câmaras de amplificação, elas foram seladas com adesivo biocompatível e o cartucho foi inserido no leitor para a resposta final. O aquecedor embutido foi ajustado para 65 °C e um smartphone foi usado para realizar a aquisição de imagens. Os reagentes RT-LAMP e a amostra de VTM contaminada com vírus foram carregados utilizando seringas através de portas de entrada compatíveis com Luer lock. A Figura 4E mostra o esquema do instrumento portátil de POC exibindo os componentes em uma vista explodida, detalhando os componentes do leitor. Enquanto um smartphone fotografa o cartucho, o aquecimento isotérmico e a iluminação são alimentados por bateria.

Para a avaliação de cada padrão médico, foi utilizado um cartucho microfluídico. Da mesma forma, cada teste incluiu a avaliação de seis subamostras (seis câmaras de amplificação em formato de torta). As imagens de fluorescência foram analisadas usando o software Image J, e a intensidade de fluorescência de cada réplica foi plotada em função do tempo (Fig. 5A). Os testes t foram realizados para mostrar que a intensidade de fluorescência das amostras positivas é estatisticamente significativa em comparação com as amostras negativas (Fig. 5B).

O cartucho possuía canais microfluídicos em formato de serpentina tridimensional para a mistura dos vírus na amostra de VTM com os reagentes de amplificação. Após a mistura, a mistura de resposta final entra nos reservatórios de amplificação. Os reservatórios foram especialmente projetados para permitir o enchimento uniforme de todas as câmaras, como pode ser visto no Vídeo S1.

Os pesquisadores concluíram que, apesar da redução na taxa estimada de detecção em relação ao teste de cotonete, o teste de saliva pode ser benéfico especificamente para populações remotas, vulneráveis ​​ou em situação de vulnerabilidade. O grupo realizou o estudo para determinar a taxa de detecção do SARS-CoV-2 usando um novo kit autoadministrado para coleta de saliva, em comparação com o teste de cotonete padrão.

Por fim, demonstramos a detecção do vírus SARS-CoV-2 em amostras científicas, utilizando amostras de VTM de pacientes e nosso leitor portátil portátil. Nesses testes, as amostras foram carregadas manualmente, sem o uso de bombas. O leitor portátil portátil incluía elementos de aquecimento e componentes ópticos necessários para realizar e registrar a reação.

As curvas características de trabalho do receptor foram plotadas para comparar amostras positivas com amostras desfavoráveis ​​em cada nível de tempo (Fig. 5C). A AUC para 40 e 30 min foi de 1,00 em cada circunstância, mostrando que nosso sistema consegue diferenciar com precisão amostras positivas de negativas após 30 min. A Figura 5D exibe as imagens de amplificação obtidas para todas as amostras examinadas no ponto final da detecção.