Tamponi micro Lash Out,

Il test può essere interessante per la sua lettura colorimetrica, che potrebbe consentire nuove applicazioni e nuovi elementi di tipo. Tuttavia, la preparazione del campione prevede una fase di estrazione dell'RNA basata su microsfere che potrebbe ridurre i costi e i tempi necessari per eseguire il test. La rapida crescita della pandemia di COVID-19 evidenzia le carenze dell'attuale paradigma di test di laboratorio per la diagnostica virale.

Tuttavia, questo test richiede il sistema GeneXpert, di cui sono disponibili solo 5.000 sistemi negli Stati Uniti. Il test richiede inoltre l'estrazione dell'RNA come fase separata dall'amplificazione e dal rilevamento, il che rappresenta un limite alla scalabilità e potrebbe limitarne la disponibilità con l'aumento della domanda di materiali critici. La tecnologia di amplificazione isotermica Abbott ID NOW garantisce il rilascio di risultati positivi in ​​meno di 15 minuti, offrendo al contempo un dispositivo di dimensioni e peso portatili.

Tuttavia, questo test richiede anche uno strumento specializzato con problemi di disponibilità adeguatamente documentati (24⇓–26). Potrebbero esserci anche problemi con l'accuratezza di questo test, sebbene le affermazioni sull'accuratezza siano ancora in fase di revisione. Un'altra tecnologia isotermica con buone prestazioni è il test diagnostico SARS-CoV-2 LAMP di Color Genomics, con un limite di rilevamento di circa 0,75 copie di RNA virale per microlitro, con una concordanza positiva e negativa al 100% per 543 campioni di pazienti.

Sebbene l'attuale paradigma di laboratorio per il SARS-CoV-2 sia scalabile e possa essere automatizzato per una produttività elevata, potrebbe esserci un'urgente necessità di soluzioni alternative che amplino le opzioni per i test presso i punti di contatto e in contesti con risorse limitate. Sebbene le fonti di test siano disponibili in alcune aree densamente popolate e ricche, alcune regioni non hanno facile accesso ai test di laboratorio, che richiedono attrezzature, infrastrutture ed esperienza specializzate.

Per ampliare questo accesso, sono necessarie tecnologie che siano veloci, trasportabili e a basso costo, ma anche in grado di offrire limiti di rilevamento paragonabili a quelli delle tecniche di laboratorio. Prima di testare i campioni clinici, è stata effettuata una valutazione iniziale della piattaforma aggiungendo SARS-CoV-2 inattivato (5.000 copie per μL) e controllo negativo (zero copie per μL) in VTM. Le immagini di fluorescenza in tempo reale con sottrazione della linea di base dell'amplificazione sulla cartuccia per 5.000 copie per μL di virus in VTM e controllo negativo sono mostrate nell'Appendice SI, Figura 1. Allo stesso modo, il filmato S1 mostra anche un filmato con timestamp dell'amplificazione sulla cartuccia per 5.000 copie per μL di virus in VTM e controllo negativo.

Sebbene la PCR rimanga il gold standard comprovato per la diagnostica scientifica, vi è un'urgente necessità di approcci diversi che siano sufficientemente economici e rapidi da fornire una diagnosi al momento dell'uso. Un limite importante degli attuali test per il rilevamento di SARS-CoV-2 deriva dalla loro dipendenza da protocolli di laboratorio, dispendiosi in termini di tempo e manodopera, per l'isolamento virale, la lisi e l'eliminazione dei materiali inibitori. Sebbene la RT-PCR rimanga il gold standard per l'esecuzione di diagnostica scientifica per amplificare le sequenze di RNA, vi è un'urgente necessità di piattaforme di test alternative che siano rapide, accurate, semplici e trasportabili. In questo articolo, mostriamo il rilevamento isotermico RT-LAMP basato su acidi nucleici di SARS-CoV-2 con una cartuccia prodotta in modo additivo e uno strumento basato su smartphone per test che possono essere eseguiti al momento della raccolta dei campioni. Il nuovo test, che si basa ancora sulla PCR per trasformare l'RNA virale in DNA e poi amplificare le sequenze, può analizzare circa 90 campioni in meno di tre ore, secondo quanto riportato da STAT, con il potenziale di raggiungere dimensioni molto maggiori nei laboratori più grandi grazie all'automazione.

Utilizzando questo pattern addizionato, un rilevamento positivo è stato assorbito in soli 30 minuti dall'inizio della reazione. Il flusso di lavoro completo, dalla raccolta del pattern alla valutazione tramite il nostro sistema mobile, è illustrato nella Figura 1A. Innanzitutto, il pattern viene acquisito dalla persona interessata utilizzando un tampone nasofaringeo. Quindi, il tampone viene trasportato nella soluzione VTM e agitato delicatamente per trasferire i virus dal tampone alla VTM.

In terzo luogo, il tampone viene scartato e aliquote del VTM vengono sottoposte a lisi termica (95 °C, 1 min). Successivamente, il campione lisato e i reagenti RT-LAMP vengono caricati rispettivamente in siringhe da 1 e 5 ml, quindi le siringhe vengono collegate alla cartuccia microfluidica e il campione lisato e i reagenti RT-LAMP vengono iniettati simultaneamente nella cartuccia. Infine, la cartuccia viene inserita nel supporto mobile dello smartphone e l'amplificazione dell'acido nucleico con colorante fluorescente intercalante avviene a 65 °C. Il monitoraggio in tempo reale dell'emissione di fluorescenza generata durante l'amplificazione viene effettuato utilizzando la fotocamera di uno smartphone e l'analisi delle immagini fornisce il momento in cui si è verificata l'amplificazione. Il test Cepheid SARS-CoV-2 può fornire risultati positivi e negativi per il rilevamento di SARS-CoV-2 rispettivamente in circa 30 e 45 minuti.

L'attuale metodo gold standard per la rilevazione del virus SARS-CoV-2 dai tamponi NP si basa sulla RT-PCR, che richiede anche protocolli di laboratorio per l'estrazione e la concentrazione virale. La maggior parte dei test diagnostici per il COVID-19 disponibili in commercio negli Stati Uniti, in Europa e in Asia sono metodi da banco destinati all'uso in laboratorio e non sono progettati specificamente per la portabilità e le applicazioni point-of-use.