Micro hisopos Lash Out

El ensayo puede resultar interesante por su lectura colorimétrica, que podría permitir nuevas aplicaciones y elementos de tipo. Sin embargo, la preparación de la muestra incluye un paso de extracción de ARN con microesferas que puede aumentar el coste y el tiempo necesarios para realizar el ensayo. El rápido crecimiento de la pandemia de COVID-19 pone de relieve las deficiencias del paradigma actual de pruebas de laboratorio para el diagnóstico viral.

Sin embargo, esta prueba requiere el sistema GeneXpert, del cual solo existen 5000 sistemas disponibles en Estados Unidos. La prueba también requiere la extracción de ARN como un paso independiente de la amplificación y la detección, lo cual limita la escalabilidad y podría limitar la disponibilidad a medida que aumenta la demanda de materiales críticos. La tecnología de amplificación isotérmica Abbott ID NOW garantiza resultados positivos en menos de 15 minutos, a la vez que ofrece un dispositivo portátil.

Sin embargo, esta comprobación requiere además un instrumento especializado con problemas de disponibilidad debidamente documentados (24⇓–26). También puede haber problemas con la precisión de esta prueba, aunque las afirmaciones al respecto siguen en revisión. Otra tecnología isotérmica con buen rendimiento es el ensayo de diagnóstico SARS-CoV-2 LAMP de Color Genomics, con un límite de detección de aproximadamente 0,75 copias de ARN viral por microlitro, con un 100% de resultados positivos y negativos para 543 muestras de pacientes.

Si bien el paradigma actual de laboratorio para el SARS-CoV-2 es escalable y puede automatizarse para un rendimiento óptimo, existe una necesidad urgente de alternativas que amplíen las opciones de pruebas en el punto de atención y en entornos de bajos recursos. Si bien existen recursos para realizar pruebas en algunas zonas densamente pobladas y ricas, algunas regiones no tienen fácil acceso a pruebas de laboratorio que requieren equipos, infraestructura y experiencia especializados.

Para ampliar este acceso, se necesitan tecnologías rápidas, portátiles y de bajo costo, que a la vez ofrezcan límites de detección comparables a los de las estrategias de laboratorio. Antes de analizar las muestras médicas, se realizó una evaluación inicial de la plataforma añadiendo SARS-CoV-2 inactivado (5000 copias por μL) y un control negativo (0 copias por μL) a VTM. Las imágenes de fluorescencia en tiempo real, con la línea base sustraída, de la amplificación en el cartucho para 5000 copias por μL de virus en VTM y el control negativo se muestran en el Apéndice SI, Fig. Asimismo, el Vídeo S1 también muestra un vídeo con marca de tiempo de la amplificación en el cartucho para 5000 copias por μL de virus en VTM y el control negativo.

Si bien la PCR sigue siendo el método de referencia para el diagnóstico científico, existe una necesidad urgente de enfoques alternativos con un coste y una rapidez suficientes para ofrecer un diagnóstico en el momento de su uso. Una limitación importante de los ensayos actuales para la detección del SARS-CoV-2 reside en su dependencia de protocolos de laboratorio, laboriosos y lentos para el aislamiento viral, la lisis y la eliminación de sustancias inhibidoras. Si bien la RT-PCR sigue siendo el método de referencia para realizar diagnósticos científicos y amplificar las secuencias de ARN, existe una necesidad urgente de plataformas de prueba alternativas que sean rápidas, precisas, sencillas y portátiles. En este trabajo, mostramos la detección isotérmica de ácidos nucleicos del SARS-CoV-2 mediante RT-LAMP con un cartucho fabricado de forma aditiva y un dispositivo para smartphones, que permite realizar pruebas en el momento de la recolección de muestras. La nueva prueba, que todavía depende de la PCR para transformar el ARN viral en ADN y luego amplificar las secuencias, puede procesar aproximadamente 90 muestras en menos de tres horas, informa STAT, con el potencial de escalar mucho más en laboratorios más grandes con automatización.

Utilizando este patrón enriquecido, se obtuvo una detección positiva en tan solo 30 minutos desde el inicio de la reacción. El flujo de trabajo completo, desde la toma del patrón hasta la evaluación con nuestro sistema portátil, se muestra en la Fig. 1A. Primero, se obtiene el patrón del paciente con un hisopo nasofaríngeo. A continuación, el hisopo se transporta a una solución de VTM y se agita suavemente para transferir los virus del hisopo al VTM.

En tercer lugar, se desecha el hisopo y se lisan térmicamente alícuotas del VTM (95 °C, 1 min). A continuación, se cargan la muestra lisada y los reactivos RT-LAMP en jeringas de 1 y 5 ml, respectivamente. A continuación, se conectan las jeringas al cartucho microfluídico y se inyectan simultáneamente la muestra lisada y los reactivos RT-LAMP en el cartucho. Finalmente, se coloca el cartucho en la base portátil del smartphone y la amplificación de ácidos nucleicos con un colorante fluorescente intercalante se realiza a 65 °C. La emisión de fluorescencia generada durante la amplificación se monitoriza en tiempo real mediante la cámara digital de un smartphone, y el análisis de imágenes proporciona el momento en que se produjo la amplificación. La prueba Cepheid SARS-CoV-2 puede mostrar resultados positivos y negativos para la detección del SARS-CoV-2 en ∼30 y 45 min, respectivamente.

El método de referencia actual para la detección del virus SARS-CoV-2 a partir de hisopos nasofaríngeos se basa en la RT-PCR, que también requiere protocolos de laboratorio para la extracción y concentración viral. La mayoría de las pruebas diagnósticas de COVID-19 disponibles comercialmente en Estados Unidos, Europa y Asia son técnicas de sobremesa diseñadas para uso en laboratorio y no están adaptadas para su portabilidad ni para aplicaciones en el punto de uso.