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Cependant, la plupart des tests de dépistage des opioïdes ne détectent pas de manière fiable l'oxycodone, l'oxymorphone, la mépéridine ou le fentanyl. De même, la plupart des tests de dépistage des benzodiazépines ne détectent pas de manière fiable le lorazépam. Cependant, des tests urinaires de dépistage de drogues, qui recherchent une drogue spécifique plutôt qu'une classe entière, sont souvent disponibles. Le dépistage urinaire de drogues est un immunoessai basé sur le principe de la liaison agressive.

Si un tel test n'est pas spécifiquement demandé, le test de base supplémentaire détectera la plupart des médicaments d'une classe, mais l'employeur ou le médecin ne sera pas satisfait de l'identification du médicament. Une idée fausse répandue est qu'un test de dépistage de drogues visant une catégorie de médicaments, par exemple les opioïdes, détectera tous les médicaments de cette classe.

L'échantillon d'urine est soumis à une chaîne de contrôle spécifique afin de garantir qu'il ne soit ni falsifié ni invalidé par une erreur du laboratoire ou du personnel. L'urine du patient ou du personnel est recueillie à distance dans un récipient sécurisé spécialement conçu, scellé avec du ruban adhésif inviolable, puis envoyée à un laboratoire d'analyse pour y être analysée afin d'y déceler la présence de drogue. La première étape sur le site d'analyse consiste à diviser l'urine en deux aliquotes. L'une d'elles est d'abord analysée à l'aide d'un analyseur effectuant un test immunologique. Afin de garantir l'intégrité de l'échantillon et de détecter d'éventuels adultérants, d'autres paramètres tels que la créatinine urinaire, le pH et la densité sont également analysés lors de ce premier test.

Si l'analyse d'urine est positive, une autre aliquote du profil est utilisée pour confirmer les résultats par chromatographie gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC-MS) ou chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse. À la demande du médecin ou de l'employeur, certains médicaments sont analysés individuellement ; il s'agit généralement de médicaments appartenant à une classe chimique considérée, pour une raison ou une autre, comme plus à risque d'abus ou préoccupants. Par exemple, l'oxycodone et la diamorphine, deux analgésiques sédatifs, peuvent être analysées.

Si une drogue est présente dans l'échantillon d'urine sous sa concentration seuil, elle ne saturera pas les sites de liaison de son anticorps. L'anticorps réagira alors avec le conjugué médicament-protéine, et une ligne colorée apparaîtra dans la zone de test de la bandelette.

Les drogues potentiellement présentes dans l'échantillon d'urine entrent en compétition avec leur conjugué pour les sites de liaison de leur anticorps. Lors du test, l'échantillon d'urine migre vers le haut par capillarité.