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Sin embargo, la mayoría de las pruebas de opioides no detectan con fiabilidad la oxicodona, la oximorfona, la meperidina ni el fentanilo. Asimismo, la mayoría de las pruebas de benzodiazepinas no detectan con fiabilidad el lorazepam. No obstante, suelen estar disponibles pruebas de drogas en orina que detectan una droga específica, en lugar de toda una clase. La prueba de drogas en orina es un inmunoensayo basado en el principio de unión agresiva.

Si dicha prueba no se solicita específicamente, la prueba básica adicional detectará la mayoría de los medicamentos de una clase, pero al empleador o al médico no le agradará la identificación del medicamento. Una idea errónea muy común es que una prueba de drogas que evalúa una categoría de medicamento, por ejemplo, opioides, detectará todos los medicamentos de esa clase.

La muestra de orina pasa por una cadena de custodia específica para garantizar que no sea manipulada ni invalidada por errores del laboratorio o de algún empleado. La orina del paciente o empleado se recoge en un lugar remoto en un recipiente seguro especialmente diseñado, se sella con cinta adhesiva y se envía a un laboratorio para su análisis en busca de drogas. El primer paso en el lugar de análisis es dividir la orina en dos alícuotas. Una alícuota se analiza primero en busca de drogas mediante un analizador que realiza un inmunoensayo como prueba preliminar. Para garantizar la integridad de la muestra y detectar posibles adulterantes, en esta prueba inicial se analizan otros parámetros, como la creatinina urinaria, el pH y la densidad relativa.

Si el resultado de la orina es positivo, se utiliza otra alícuota del patrón para confirmar los hallazgos mediante cromatografía de gases con espectrometría de masas (GC-MS) o cromatografía líquida con espectrometría de masas. Si el médico o el empleador lo solicitan, se analizan individualmente ciertos medicamentos; estos suelen ser medicamentos que pertenecen a una clase química y que, por diversas razones, se consideran más propensos al abuso o preocupantes. Por ejemplo, se pueden analizar la oxicodona y la diamorfina, ambos analgésicos sedantes.

Si una droga está presente en la muestra de orina por debajo de su punto de corte, no saturará los sitios de unión de su anticuerpo. Este reaccionará con el conjugado fármaco-proteína y aparecerá una línea de color visible en la zona de la línea de prueba de la tira reactiva.

Los fármacos presentes en la muestra de orina compiten con su respectivo conjugado farmacológico por los sitios de unión a su anticuerpo específico. Durante la prueba, la muestra de orina migra hacia arriba por capilaridad.