Microtamponi rosa

I limiti di rilevabilità sopra indicati nel fluido nasale ammontano a 10 copie per μL e 100 copie per μL di virus in VTM dopo il cambio del tampone, valori paragonabili a quelli riscontrati negli esperimenti di controllo in cui i virus sono stati aggiunti direttamente in VTM. Ciò si traduce in un rilascio virale efficiente in 500 μL di VTM, con un'efficienza di trasferimento prossima al 100%. Successivamente, abbiamo confrontato il LOD delle 4 unità di primer selezionate amplificando diluizioni seriali di RNA di SARS-CoV-2 (Fig. 1D). Le reazioni eseguite con i primer del gene N hanno mostrato il LOD più basso e i tempi di amplificazione più rapidi, con 50 copie per μL di amplificazione entro 25 minuti dall'inizio della risposta. Sulla base di questi risultati, abbiamo selezionato il set di primer 1, focalizzato sul gene N, come set di primer definitivo per il nostro test RT-LAMP per il rilevamento di SARS-CoV-2.

La diagnosi avviene tramite la scoperta del parassita nel fluido vaginale mediante l'utilizzo di un microscopio, la coltura della vagina o delle urine o il test del DNA del parassita. TricomoniasiAltri nomiTrichMicrografia che mostra un esito positivo per la tricomoniasi.

Tutti i 10 campioni riconosciuti come positivi mediante RT-PCR e tutti i 10 campioni riconosciuti come negativi mediante RT-PCR sono risultati inoltre positivi e negativi mediante il nostro test RT-LAMP (Fig. 3B). Pertanto, la sensibilità e la specificità del nostro test per SARS-CoV-2 sono state del 100%, con percentuali di falsi negativi e falsi positivi pari allo 0%.

I volumi dei campioni sono stati diversi, in modo che il volume del campione di fluido nasale arricchito fosse pari al 12,5%, 25% o 50% del volume totale della reazione. Una reazione è stata eseguita nello stesso formato, in cui la quantità totale della reazione era di 96 μL, di cui 48 μL rappresentavano il volume del campione. In tutte queste reazioni, le concentrazioni di tutti gli altri componenti della reazione sono state mantenute come descritto in precedenza per la reazione da 16 μL. Le reazioni eseguite con virus inattivati ​​al calore includevano una fase di lisi termica. Inizialmente diluiti in serie in tampone TE, i campioni virali sono stati poi lisati termicamente in un riscaldatore a 95 °C per 1 minuto prima di essere aggiunti alla miscela di reazione finale.

Una tabella che mostra le istanze soglia (test RT-LAMP) e i valori Ct è mostrata nell'Appendice SI, Tabella S2. Per 500 μL di VTM con il 12,5% e il 50% di VTM in risposta, il LOD è migliorato rispettivamente a 250 copie per μL e a circa 2,5E3 copie per μL di virus nel fluido nasale.

La tricomoniasi è un'infezione sessualmente trasmissibile che si diffonde più frequentemente attraverso rapporti sessuali vaginali, orali o anali. Le persone infette possono diffondere la malattia anche in assenza di sintomi.