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Un parametro importante è la dimensione della ferita, che viene monitorata tramite strategie di misurazione in scala o tramite immagini. Inoltre, vengono descritti il colore e l'umidità delle ferite. Un altro metodo di valutazione è la profondità del dolore avvertito dai pazienti.
Dopo la rimozione dei controlli e dei campioni, le cellule sono state osservate in sezione di contrasto per valutarne la densità e la morfologia cellulare. Successivamente, le cellule sono state colorate con cristalvioletto allo 0,2% per 20 minuti a temperatura ambiente e lavate. Sono state registrate la copertura cellulare sulla piastra e le morfologie cellulari.
Di conseguenza, entrambi i tipi di tamponi indicatori possono essere valutati visivamente attraverso il loro viraggio dal verde al rosso all'aumentare del pH. Per questa analisi, i tamponi indicatori sono stati posizionati in soluzioni tampone fosfato a pH diverso e le variazioni di colore sono state registrate tramite fotografia digitale. Le cellule MRC-5 sono state seminate a densità di 300.000/pozzetto in piastre da 6 pozzetti 24 ore prima dell'esperimento per ottenere la confluenza. Per l'analisi dei tamponi di cotone a diretto contatto con le cellule, le cellule sono state scoperte a 2 tamponi di cotone/pozzetto in modo da coprire circa 1/7 dell'area di crescita. Un foglio di rame (Glas-per-Klick, Berlino, Germania) è servito come controllo positivo e un foglio di PVC come controllo negativo.
In un tipico processo di immobilizzazione, ogni 50 mg di GJM-492 o di GJM-503 sono stati trattati con 0,5 g di acido solforico concentrato per 30 minuti a temperatura ambiente. Questo ha convertito il gruppo 2-idrossietilsolfonile del rispettivo colorante indicatore nel solfonato. Quindi, la combinazione è stata versata in 360 mL di acqua distillata e neutralizzata con 1,0 mL di una soluzione di idrossido di sodio al 30%. A questo punto, sono stati aggiunti 40 mg del colorante inerte RBBR in 40 mL di acqua, seguiti dall'aggiunta di 12,5 g di carbonato di sodio in 100 mL di acqua e 2,5 mL di una soluzione di idrossido di sodio al 30%.
Dopo l'aggiunta di idrossido di sodio e carbonato di sodio, i solfonati coloranti sono stati trasformati in derivati vinilsolfonilici e accoppiati tramite addizione di Michael ai gruppi ossidrilici della cellulosa. Dopo 30 minuti, i tamponi di cotone colorati sono stati rimossi dal bagno di tintura e lavati con abbondanti quantità di acqua distillata fino a ottenere una colorazione verde, indicante la completa rimozione del mezzo di risposta alcalina. La combinazione di GJM-492 con RBBR ha prodotto tamponi di cotone indicatori di tipo 1, mentre la miscela di GJM-503 con RBBR ha prodotto tamponi di cotone indicatori di tipo 2. I tamponi di cotone sterili (Cod. 6100/SG/CS) con una lunghezza di 150 mm, un'asta in plastica e una testa in Rayon provenivano da Nuova Aptaca SRL. Attualmente, l'analisi delle ferite è una questione qualitativa piuttosto che quantitativa e, di conseguenza, l'effetto del trattamento locale sulla guarigione delle ferite non è ben quantificato.
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