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Un parámetro importante es la dimensión de la herida, que se monitoriza mediante estrategias de escalado de medición o imágenes. Además, se describen el color y la humedad de las heridas. La intensidad del dolor que sienten los pacientes es otro método de evaluación.
Tras retirar los controles y las muestras, se observaron las células en contraste de corte para evaluar su densidad y morfología. Posteriormente, se tiñeron con violeta cristal al 0,2 % durante 20 min a temperatura ambiente y se lavaron. Se registraron la cobertura celular en la placa y las morfologías celulares.
En consecuencia, los dos tipos de hisopos indicadores pueden evaluarse visualmente a través de su cambio de color de verde a rojo a medida que aumenta el pH. Para este análisis, los hisopos indicadores se colocaron en soluciones tampón de fosfato de diferente pH y los ajustes de tono se registraron mediante fotografía digital. Se sembraron células MRC-5 a densidades de 300.000/pocillo en placas de 6 pocillos 24 h antes del experimento para lograr la confluencia. Para el análisis de hisopos de algodón en contacto directo con las células, estas se expusieron a 2 hisopos de algodón/pocillo para cubrir ~1/7 del área de crecimiento. Una lámina de cobre (Glas-per-Klick, Berlín, Alemania) sirvió como control positivo y una lámina de PVC como control adverso.
En un proceso de inmovilización típico, cada 50 mg de GJM-492 o GJM-503 se trataron con 0,5 g de ácido sulfúrico concentrado durante 30 min a temperatura ambiente. Esto convirtió el grupo 2-hidroxietilsulfonilo del colorante indicador respectivo en el sulfonato. A continuación, la combinación se vertió en 360 ml de agua destilada y se neutralizó con 1,0 ml de una solución de hidróxido de sodio al 30 %. En esta etapa, se añadieron 40 mg del colorante inerte RBBR en 40 ml de agua, seguido de la adición de 12,5 g de carbonato de sodio en 100 ml de agua y 2,5 ml de una solución de hidróxido de sodio al 30 %.
Tras la adición de hidróxido de sodio y carbonato de sodio, los sulfonatos colorantes se transformaron en derivados de vinilsulfonilo y se aparearon mediante la adición de Michael a los grupos hidroxilo de la celulosa. Después de 30 min, los hisopos de algodón coloreados se retiraron del baño de tintura y se lavaron con abundante agua destilada hasta obtener un color verde, lo que indica la eliminación total del medio de reacción alcalino. La combinación de GJM-492 con RBBR dio hisopos de algodón indicadores tipo 1, mientras que la mezcla de GJM-503 con RBBR dio hisopos de algodón indicadores tipo 2. Los hisopos de algodón estériles (Cod.6100/SG/CS) con una longitud de 150 mm, un mango de plástico y una cabeza de rayón fueron de Nuova Aptaca SRL. Actualmente, el análisis de las heridas es una cuestión cualitativa más que cuantitativa y, en consecuencia, el efecto del tratamiento local en la cicatrización de las heridas no está bien cuantificado.
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