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Um parâmetro importante é a dimensão da ferida, que é monitorada por estratégias de escala de medição ou por imagens. Além disso, a coloração e a umidade das feridas são descritas. A intensidade da dor sentida pelos pacientes é outro método de avaliação.
Após a remoção dos controles e das amostras, as células foram visualizadas em cortes contrastados para avaliar a densidade e a morfologia celular. Posteriormente, as células foram coradas com violeta de cristal a 0,2% por 20 minutos à temperatura ambiente e lavadas. A cobertura celular na placa e as morfologias celulares foram registradas.
Consequentemente, os dois tipos de cotonetes indicadores podem ser avaliados visualmente por meio da mudança de cor de verde para vermelho à medida que o pH aumenta. Para essa análise, os cotonetes indicadores foram posicionados em soluções tampão de fosfato de diferentes pHs e os ajustes de tonalidade foram registrados por meio de fotografia digital. Células MRC-5 foram semeadas em densidades de 300.000/poço em placas de 6 poços 24 horas antes do experimento para atingir a confluência. Para a análise de cotonetes em contato direto com as células, as células foram expostas a 2 cotonetes/poço para cobrir ~1/7 da área de crescimento. Uma folha de cobre (Glas-per-Klick, Berlim, Alemanha) serviu como controle positivo e uma folha de PVC como controle adverso.
Em um processo típico de imobilização, cada 50 mg de GJM-492 ou GJM-503 foi tratado com 0,5 g de ácido sulfúrico concentrado por 30 minutos à temperatura ambiente. Isso converteu o grupo 2-hidroxietilsulfonila do respectivo corante indicador no sulfonato. Em seguida, a mistura foi vertida em 360 mL de água destilada e neutralizada com 1,0 mL de uma solução de hidróxido de sódio a 30%. Nesta etapa, 40 mg do corante inerte RBBR em 40 mL de água foram adicionados, seguidos pela adição de 12,5 g de carbonato de sódio em 100 mL de água e 2,5 mL de uma solução de hidróxido de sódio a 30%.
Após a adição de hidróxido de sódio e carbonato de sódio, os sulfonatos corantes foram transformados em derivados de vinilsulfonila e pareados por meio da adição de Michael aos grupos hidroxila da celulose. Após 30 minutos, os cotonetes coloridos foram removidos do banho de tingimento e lavados com grandes quantidades de água destilada até a obtenção de uma cor verde, indicando a remoção total do meio de resposta alcalina. A combinação de GJM-492 com RBBR produziu cotonetes indicadores tipo 1, enquanto a mistura de GJM-503 com RBBR produziu cotonetes indicadores tipo 2. Os cotonetes estéreis (Cod. 6100/SG/CS) com comprimento de 150 mm, haste de plástico e cabeça de rayon são da Nuova Aptaca SRL. Atualmente, a análise de feridas é uma questão qualitativa e não quantitativa e, consequentemente, o efeito do tratamento local na cicatrização de feridas não é bem quantificado.
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