مسحة إسفنجية دقيقة برأس عالي الدقة

في حين أن معظم الفحوصات، سواءً كانت لعابًا أم لا، تُحلل باستخدام تقنيات تعتمد على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، إلا أن هناك بدائل واعدة أخرى، مثل التضخيم الحراري المتساوي بوساطة العروة، والذي حصل أيضًا على ترخيص الاستخدام الطارئ للاختبار باستخدام مسحات البلعوم الأنفي. وقد واجهت الولايات المتحدة صعوبة في تطبيق اختبارات متسقة وواسعة النطاق خلال الجائحة، مما صعّب على مسؤولي الصحة العامة تتبع انتشار الفيروس. بالإضافة إلى ذلك، غالبًا ما تنفد المعدات والكواشف اللازمة لإجراء فحوصات تفاعل البوليميراز المتسلسل، بدءًا من المسحات اللازمة لجمع العينة وصولًا إلى الكواشف التي تستخلص الحمض النووي الريبي الفيروسي. ستساعد عينات التحكم التي تم جمعها بشكل صحيح في استبعاد التلوث الخارجي لعينة السطح.

لجميع القيم المقاسة في الأقسام السابقة واللاحقة، نناقشها مع الجدول 1. جُمعت عينات خزعة الغشاء المخاطي باستخدام منظار فيديو متعدد الاستخدامات وملقط خزعة متعدد الاستخدامات (ويلسون-كوك؛ المجموعة الأوروبية للتنظير الداخلي، فوجينون ميديكال هولندا، فينينداال، هولندا). حُصدت عينات خزعة الغشاء المخاطي من القولون السيني على بُعد 20-30 سم من حافة الشرج. لكل عينة، غُسل نمط مخاطي واحد مرتين في 500 ميكرولتر من محلول فوسفات الصوديوم (PBS) قبل التجميد السريع في النيتروجين السائل، ووُضع نمط ثانٍ في وعاء مليء بـ 500 ميكرولتر من محلول فوسفات الصوديوم (PBS) وجُمّد سريعًا في النيتروجين السائل. في مجموعة تنظير القولون، جُمعت مسحات من المستقيم وقت التنظير، قبل العملية التنظيرية مباشرةً.

أخيرًا، بما أننا وجدنا اختلافًا في أنماط ميكروبات مسحة المستقيم عن أنماط ميكروبات الغشاء المخاطي والبراز في مجموعة تنظير القولون، فقد اهتممنا بالتشابه بين ميكروبات البراز وميكروبات الغشاء المخاطي. ووجدنا أن الارتباطات بين عينات البراز وخزعات الغشاء المخاطي كانت ضئيلة بقدر ارتباط عينات المسحة بكلٍّ من هذه الأنواع من الأنماط.

يجب أن يكون الحد الأدنى لكمية المياه المُجمعة كافيًا لإجراء جميع التحاليل المطلوبة؛ ويُعتبر 100 مل الحد الأدنى المناسب. تزعم منشورات فيسبوك، التي انتشرت مئات المرات، أن جائحة فيروس كورونا ما هي إلا غطاء لجهود ممولة من مؤسسة غيتس لزرع شرائح دقيقة عند مسح أنوف أو حناجر المرضى أثناء اختبار كوفيد-19. هذا زيف؛ فالجائحة حقيقية، وقد نفت المؤسسة هذا الادعاء، ويقول الخبراء إن هناك سببًا طبيًا لطريقة استخدام المسحات عند اختبار المرض. قد تكون مسحات المستقيم وعينات البراز وخزعات الغشاء المخاطي متشابهة جدًا في بعض الأحيان، ولكن بشكل عام، يبدو أن هذه الأنواع الثلاثة من العينات تحتوي على ميكروبات مختلفة إلى حد ما.

أكد هذا أن المسحات المجمعة ذاتيًا كانت متوافقة بشكل كبير مع المسحات المجمعة سريريًا عند تخزينها بنفس الطريقة. لدراسة تأثير بروتوكول تخزين الأنماط غير الصارم، قارنا ملفات تعريف ميكروبيوتا مسحات المستقيم المجمدة بسرعة مع ملفات تعريف مسحات المستقيم التي تم تخزينها في درجة حرارة الغرفة في RTF لمدة ساعتين قبل التجميد عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. نظرًا لأن ظروف التخزين قد تؤثر على البكتيريا الموجبة والسالبة لصبغة الجرام بشكل مختلف، فقد قمنا بتحليل البيانات بشكل منفصل لـ AFFV و Bacteroidetes. تم حساب الارتباطات للملفات المستمدة من عينات المسحات المجمدة بسرعة مقابل الملفات التعريفية المتوسطة لعينات المسحات المكررة المخزنة في RTF في درجة حرارة الغرفة قبل التجميد. بالنسبة لكل من AFFV و Bacteroidetes، أظهرت المقارنات داخل الشخص تشابهًا كبيرًا كما تم قياسه بواسطة متوسط ​​R2 مرتفع.

مرة أخرى، اكتُشف ارتباط أفضل بين البكتيريا العصوية والبكتيريا الفموية. وللتحقق مما إذا كانت العينات الذاتية التي أخذها المرضى في منازلهم ستُعطي نتائج مماثلة للمسحات المأخوذة في العيادات الخارجية، قارنّاها بعشرة أفراد. ومرة ​​أخرى، قارنّا الأنماط الجينية بشكل متبادل، وحُللت النتائج بشكل منفصل لكل من البكتيريا الفموية والبكتيريا الفموية. وأظهر هذا التحليل أيضًا ارتباطات عالية داخل الموضوع، وارتباطات منخفضة بين الأشخاص.

بخلاف فحص مياه الشرب للكشف عن البكتيريا القولونية، قد تخضع عينات المياه لدعم التحقيقات الوبائية لتفشي الأمراض لتعديلات تُمليها الظروف السائدة في المنشأة. كما قد لا تكون استراتيجيات فحص مسببات الأمراض المنقولة بالمياه موحدة. لذلك، ينبغي تضمين عينات الضبط أو المقارنة في تصميم التجربة. يجب توثيق أي انحراف عن التقنية المتبعة توثيقًا كاملًا، ويجب مراعاته عند تفسير النتائج واستراتيجيات الزراعة. إذا احتوت المياه على مستويات مرتفعة من المعادن الثقيلة، فيجب إضافة عامل مُخلّب إلى العينة.

أُدخلت مسحات شرجية في القناة الشرجية، بعد حافة الشرج (± ثلاثة سم). وُضعت مسحتان شرجيتان في وعاء يحتوي على ٥٠٠ ميكرولتر من محلول سائل النقل المُخفَّض، وحُفظت في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين قبل التخزين عند درجة حرارة -٢٠ درجة مئوية.