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Dependendo das instruções do fabricante, a preparação da biblioteca de sequenciamento shotgun começa com 0,01–10 ng por amostra. A massa total de DNA recuperada nas frações de VLP (fago + bactéria, conforme determinado por qPCR) variou de 0,63 ± 0,04 ng (da amostra originalmente contendo 1,9 × 108 vírions) a 1,2 ± 0,09 pg (da amostra originalmente contendo 1,9 × 105 vírions) (Fig. 2a).
Nenhuma distinção importante foi observada em qualquer diluição de manchas de sangue ou saliva processadas com a PCR direta modificada, mas a completude do perfil e a RFU total foram melhoradas em geral em comparação com as manchas obtidas com cotonetes ou 4N6FLOQSwabs™. Esta pesquisa corrobora a hipótese de que o microFLOQ® Direct Swab é capaz de adquirir quantidades mínimas de DNA de tecido de algodão e também pode ser considerado uma metodologia alternativa de pré-triagem em casos de biologia forense. O Kit de Coleta de Vírus foi desenvolvido para coleta, transporte e armazenamento rápido de DNA/RNA total em amostras médicas, como saliva, sangue, soro, fezes e fluidos corporais, etc. O conservante lisará os organismos e inativará as células, bactérias e vírus.
Um pré-requisito para a utilização da avaliação da microbiota como ferramenta científica é a amostragem e a preservação eficientes e consistentes das amostras. Uma questão importante a esse respeito é o impacto do manuseio da amostra e o efeito da preparação intestinal por meio da limpeza intestinal na composição da microbiota nas fezes e intestinos. Os FLOQSwabs®, anatomicamente projetados, foram desenvolvidos a partir de uma extensa colaboração com médicos e microbiologistas científicos, e de um esforço incansável para otimizar a eficiência da coleta e do transporte de amostras pré-analíticas. Os resultados são eficiência e reprodutibilidade otimizadas da coleta de analitos alvo, dinâmica de fluxo e sensibilidade do ensaio aprimoradas, além de capacidades de teste expandidas.
À medida que o número de casos de COVID-19 continua a crescer globalmente, testes prontamente disponíveis e confiáveis são importantes para identificar e retardar a propagação da doença. No entanto, estamos enfrentando problemas específicos em nossa cadeia de suprimentos que restringem nossa capacidade de testagem, especialmente a coleta de amostras. Esse desafio, no entanto, representa uma oportunidade para a comunidade científica repensar nossa abordagem às tecnologias de coleta de amostras. Amplificação direta por PCR de DNA de amostras de sangue humano, saliva e toque coletadas com swabs microFLOQ®. O swab direto microFLOQ® foi examinado por meio da coleta de amostras de sangue diluído, sêmen e saliva depositadas em tecido de algodão.
A tipagem de DNA foi realizada utilizando o Sistema PowerPlex® Fusion 6C por PCR direta ou PCR direta modificada. A PCR direta de swabs amostrados no centro de uma mancha, em comparação com suas respectivas amostras de borda, apresentou maior completude de perfil e itens fluorescentes relativos completos para todas as diluições de manchas de sangue e sêmen examinadas. A PCR direta modificada utilizou DNA molde eluído da cabeça do swab usando o Kit Casework Direct, Custom e lavagens contendo aditivo de 1-tioglicerol ou sem TG. A PCR direta modificada apresentou resultados combinados para manchas de sangue, saliva e sêmen, com as manchas de sêmen exibindo diferenças importantes na completude de perfil (5% e 1%) e RFU completa (pura, 5% e 1%) com a adição de TG ao Reagente Casework Direct.
A pesquisa sobre a composição da microbiota intestinal na saúde e na doença floresceu desde a introdução de abordagens moleculares para sua caracterização. A partir das inúmeras investigações conduzidas nessa área, acumulam-se evidências de que a composição da microbiota intestinal pode estar relacionada a estados de doença, principalmente em doenças inflamatórias intestinais, obesidade e desnutrição.
As amostras salvas podem ser utilizadas em experimentos científicos subsequentes, como extração de DNA/RNA, testes de PCR ou sequenciamento. O pacote é ideal para coletar amostras para identificação do coronavírus e estudos posteriores. SV e IAC conceberam o projeto, todos os autores projetaram os experimentos e a amostragem, SV e YHK realizaram os experimentos, JD coletou amostras médicas, SV, YHK e IAC analisaram os dados, SV e IAC redigiram o manuscrito. Como este protocolo se destina a fornecer amostras para sequenciamento de alto rendimento, a massa total recuperada é uma métrica crucial.
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