Cotonetes de microfibra

Demonstramos ainda nosso ensaio detectando o vírus SARS-CoV-2 em 20 amostras clínicas. Por fim, apresentamos um sistema POC portátil e em tempo real para detectar SARS-CoV-2 em amostras de VTM usando um cartucho tridimensional fabricado aditivamente e um leitor para smartphone. O sistema POC foi testado utilizando 10 amostras clínicas e foi capaz de detectar SARS-CoV-2 nessas amostras clínicas, distinguindo amostras positivas de amostras negativas após 30 minutos. Este trabalho demonstra uma via alternativa para o diagnóstico de SARS-CoV-2 que não requer infraestrutura laboratorial convencional, em ambientes onde o diagnóstico é necessário no nível da coleta de amostras. Neste estudo, demonstramos que os swabs retais representam uma excelente maneira de fornecer perfis de microbiota altamente reprodutíveis.

Atualmente, as amostras fecais são normalmente coletadas pelos próprios pacientes em casa. Isso introduz potencial contaminação durante a coleta, atraso antes do congelamento, congelamento acima de -20 °C e descongelamento durante o transporte para o laboratório. Há evidências convincentes de que esses componentes podem introduzir variações significativas o suficiente para impedir o diagnóstico microbiano. Uma alternativa é a amostragem direta da mucosa intestinal por meio de biópsias durante a endoscopia. Embora essas amostras possam ser coletadas de forma altamente padronizada, a natureza invasiva do procedimento de amostragem impede a implementação em larga escala como ferramenta de triagem ou acompanhamento.

Portanto, propomos que a amostragem da microbiota intestinal com fezes ou por swab retal, sem preparo intestinal prévio, seja provavelmente a metodologia mais popular para a análise de microbiota real e intacta. Os swabs retais são uma excelente técnica de amostragem da microbiota intestinal em ambiente médico, sem as desvantagens da coleta de fezes ou da coleta de amostras de mucosa. Os indivíduos não precisam coletar amostras fecais em casa e não precisam ser preparados ou submetidos a procedimentos invasivos. A aplicabilidade dos swabs retais é destacada pelo fato de já serem comumente utilizados na rotina médica e poderem ser coletados em todas as consultas.

Atualmente, o tipo de amostra mais utilizado para avaliação da microbiota intestinal são as fezes. O diagnóstico microbiano clássico em fezes concentra-se na gastroenterite infecciosa. No entanto, para uma avaliação mais completa da microbiota intestinal, a amostragem, o armazenamento e o processamento das amostras têm um impacto significativo na análise da composição resultante. A amostra ideal deve ser fácil de obter de forma padronizada, sem perturbação prévia da microbiota.

Os perfis são muito semelhantes aos de amostras fecais em pacientes não preparados, particularmente para o filo Bacteroidetes. Sugerimos que os swabs retais podem ser ideais para pesquisas em larga escala e para fins médicos de rotina de perfilamento da microbiota. Enquanto a correlação dos perfis dos swabs com os perfis fecais foi bastante alta em pacientes que não realizaram preparação intestinal extensa para colonoscopia, a similaridade entre os diferentes tipos de padrões foi acentuadamente menor no grupo submetido à colonoscopia. Muito provavelmente, isso se deveu à lavagem intestinal preparatória, que claramente afetou o conteúdo intestinal.

Além disso, antes da colonoscopia, os pacientes devem ser preparados com esquemas laxativos rigorosos, que comprovadamente perturbam a microbiota intestinal. Os swabs retais podem ser facilmente obtidos e armazenados imediatamente em um padrão padronizado, sem perturbação prévia da microbiota. Os swabs retais já são usados ​​regularmente para triagem de micróbios resistentes e demonstraram ser muito eficazes para esse fim. A composição da microbiota intestinal está associada a inúmeras doenças, principalmente doença inflamatória intestinal, obesidade e desnutrição.

Caracterizamos o ensaio mergulhando swabs em fluido nasal artificial contaminado com o vírus, transferindo o swab para um meio de transporte viral e coletando uma quantidade de VTM para realizar o ensaio RT-LAMP sem um kit de extração de RNA. O ensaio tem um limite de detecção de 50 cópias de RNA por μL na solução de VTM em 30 minutos.

A pandemia de COVID-19 representa um caso urgente em que existe uma lacuna entre a disponibilidade de diagnósticos de última geração e as necessidades atuais. À medida que protocolos de ensaio e sequências de primers se tornam amplamente reconhecidos, muitos laboratórios realizam testes diagnósticos utilizando métodos como RT-PCR ou amplificação isotérmica mediada por loop de transcrição reversa (RT-LAMP). Neste artigo, relatamos um ensaio isotérmico RT-LAMP para a detecção do vírus da síndrome respiratória aguda grave coronavírus 2 (SARS-CoV-2) e demonstramos o ensaio em amostras médicas usando um instrumento simples e acessível para ponto de atendimento.